Определение перестроек гена BCL2 (18q21) (FISH, парафиновый блок) в Ташкенте

Показания к назначению анализа:

• подозрение на фолликулярную лимфому;
• дифференциальная диагностика лимфопролиферативных заболеваний (патологий, которые сопровождаются неконтролируемым делением аномальных лимфоцитов);
• выбор тактики лечения при подтвержденном диагнозе «фолликулярная лимфома».

Фолликулярная лимфома

Лимфома — злокачественная опухоль, которая развивается из клеток иммунной системы (лимфоцитов) и постепенно распространяется по всему организму.

Лимфомы подразделяются на две группы:

• лимфогранулематоз (болезнь Ходжкина, или ходжкинские лимфомы);
• неходжкинские лимфомы (лимфосаркомы, НХЛ).

Самая частая среди неходжкинских лимфом — фолликулярная лимфома, или лимфома клеток фолликулярного центра. Она развивается из B-лимфоцитов — клеток, которые играют важную роль в формировании антительного иммунитета.

Фолликулярная лимфома составляет 35% от всех неходжкинских лимфом и в среднем 20% от всех лимфопролиферативных заболеваний.

Симптомы фолликулярной лимфомы

Фолликулярную лимфому трудно диагностировать, так как у большинства пациентов заболевание развивается медленно и на первых этапах может никак не проявляться. Кроме того, симптомы фолликулярной лимфомы сходны с симптомами многих других заболеваний.

Первые симптомы фолликулярной лимфомы напоминают симптомы ОРВИ или ОРЗ:

• слабость;
• повышение температуры до 38 °С и выше;
• потливость, особенно в ночное время.

Затем в течение нескольких недель снижается вес, увеличиваются лимфатические узлы.

Также фолликулярную лимфому легко спутать с выраженной фолликулярной гиперплазией — доброкачественным состоянием, при котором увеличиваются лимфатические узлы.

Причины возникновения фолликулярной лимфомы

Фолликулярная лимфома возникает из-за мутаций в генах — определённых участках молекулы ДНК. ДНК — это длинная двойная цепочка органических соединений. Она хранится в ядре каждой клетки в виде плотно скрученных структур — хромосом. В ядре каждой человеческой клетки 46 хромосом.

У 90% пациентов опухоль возникает из-за переноса гена BCL-2 с 18-й хромосомы на 14-ю. Такой перенос генов называют транслокацией и записывают с помощью специальных обозначений — t(14:18).

Ген BCL-2 кодирует семейство белков, которые регулируют клеточную гибель (апоптоз). Если происходит транслокация этого гена, начинает синтезироваться повышенное количество белков BCL-2, которые подавляют процесс апоптоза. Баланс между ростом и гибелью клеток нарушается. Клетки с транслокацией t(14:18) перестают гибнуть, их становится больше, у них появляются дополнительные мутации. В результате они перерождаются в раковые.

Факторы риска развития лимфомы:

• возраст пациентов (чаще встречается в возрасте 60 лет и старше);
• иммунодефицитные состояния;
• некоторые вирусные инфекции (вирус Эпштейна — Барр, Т-лимфотропный вирус человека I типа, вирус герпеса человека VIII типа);
• генетическая предрасположенность;
• этническая принадлежность (заболеваемость выше у евреев; в США заболевание встречается у представителей европеоидной расы чаще, чем у афроамериканцев; реже всего фолликулярная лимфома наблюдается у китайцев и японцев);
• употребление табака.

Поскольку у заболевания нет яркой симптоматики, пациенты, как правило, поздно обращаются к врачу и в 80% случаев диагноз ставят тогда, когда процесс уже распространился по всему организму. У 40% пациентов поражение затрагивает костный мозг.

Чтобы выявить фолликулярную лимфому, используется метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH).

Источники

1. Фолликулярная лимфома у взрослых : клинические рекомендации. 2016.
2. Мекешкина Е. А. Дифференциальная диагностика фолликулярной гиперплазии лимфатического узла и фолликулярной лимфомы / Е. А. Мекешкина, С. А. Суханов, Е. А. Ложкин, Н. А. Кирьянов // Здоровье, демография, экология финно-угорских народов, 2018. №1. С. 44–46.
3. Селезнев А. А. Лимфома из клеток фолликулярного центра: современное состояние и перспективы морфологической диагностики // Вестник неотложной и восстановительной медицины, 2007. №4. С. 628–631.
4. Фолликулярная лимфома : клинические рекомендации. 2020.
5. Меджитов Р. М. Bcl-2 — белок внутренней мембраны митохондрий, блокирующий запрограммированную смерть клеток // Биохимия, 1991. Т. 56. В. 10. С. 1916–1917.
6. Sengupta P., Chattopadhyay S., Chatterjee. S. G-Quadruplex surveillance in BCL-2 gene: a promising therapeutic intervention in cancer treatment // Drug discovery today, 2017. Vol. 22 (8). P. 1165–1186. doi:10.1016/j.drudis.2017.05.001
7. Patty D. N. J., Safitri N. A., Henny Saraswati H. Specific Primer for Human Bcl-2-Protein Expression Analysis // The 2019 International Conference on Biotechnology and Life Sciences, KnE Life Sciences, 2020. P. 46–52. doi:10.18502/kls.v5i2.6438
8. Roufayel R. Regulation of stressed-induced cell death by the Bcl-2 family of apoptotic proteins // Molecular Membrane Biology, 2016. Vol. 33(6–8). P. 89–99. doi:10.1080/09687688.2017.1400600
9. Shuangge Ma. Risk Factors of Follicular Lymphoma // Expert Opinion on Medical Diagnostics, 2012. Vol. 6. Issue 4. P. 323–333. doi:10.1517/17530059.2012.686996
10. Фолликулярная лимфома // Справочник лекарственных средств Vidal
11. Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) / Компания UNIM 
12. Использование метода флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для обнаружения генетических изменений у мужчин с нарушением сперматогенеза / Компания «Медико-диагностическая лаборатория»
13. Follicular Lymphoma / NORD

Особенности и преимущества методики

FISH (флюоресцентная гибридизация in situ, то есть в исходном месте) — метод анализа генетического материала клетки, при котором используются ДНК-зонды — искусственно созданные фрагменты ДНК, содержащие флюоресцентные метки.

ДНК-зонды связываются с комплементарными (взаимно соответствующими) участками ДНК исследуемых клеток. Изучение полученных образцов под флюоресцентным микроскопом позволяет выявлять различные аномалии в структуре генетического материала. Такие аномалии называют перестройками.

В анализе на фолликулярную лимфому используют ДНК-зонд, который позволяет обнаружить перестройку гена BCL2. В норме этот ген располагается на участке 18-й хромосомы, обозначаемом шифром 18q21.

Для исследования используют фрагмент ткани костного мозга, который «впаивают» в парафиновый блок. В таком виде при правильной температуре биоматериал может храниться очень долго. Блоки можно использовать для проведения повторных исследований, что очень важно при подборе тактики лечения. После исследования блок возвращают пациенту.